HEMOTEST MANUAL DE INSTRUCCIONES REF 5451

HEMOTEST®
REF 5451
MANUAL DE INSTRUCCIONES
All Diag
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Version 12
Significado de los pictogramas
Pictogramas
Significado
Atención, ver
instrucciones de uso
Solo para
diagnóstico in vitro
Conservar
entre 4 y 30 °C
30° C
4°C
Pruebas por kit
Caducidad
Número de lote
Fabricante
No reutilizable
Código
Directiva 98/79/CE
Version 12- Actualizado 04/05/2011-Revisión 06/02/2014
FABRICACIÓN - ALLDIAG
10, rue Ettoré Bugatti - BP 28006
67038 STRASBOURG Cedex 2 - France
Site : www.alldiag.com - E-mail : info@alldiag.com
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Version 12
HEMOTEST®
Ensayo inmunocromatográfico rápido, solo para uso de diagnóstico in vitro, para el cribado de pólipos
y cánceres colo-rectales mediante la puesta en evidencia de hemoglobina humana en las heces.
1.
Objetivo de la prueba
Hemotest® es un ensayo rápido y sencillo para la detección de hemoglobina humana en heces. La puesta en
evidencia de sangre oculta en las heces se inscribe en el proceso de cribado masivo de pólipos y cánceres
colorectales, que preconiza la inclusión de las personas mayores de 50 años.
2.
Presencia de hemoglobina humana en las heces
El método Guaiaco, desarrollado por Van Deen en 1864 ha permitido la detección de sangre en distintos medios.
Boas inició el uso de este método en 1908 para la puesta en evidencia de sangre oculta en heces. Sin embargo,
para obtener resultados precisos, las pruebas basadas en la prueba del guaiaco, requieren que se eviten ciertos
alimentos, medicamentos y vitaminas antes y durante el período de la toma de muestras. Varios autores también
han encontrado que algunos pacientes con cáncer o adenoma colorrectal dan resultados negativos con estas
pruebas, debido a que no poseen la sensibilidad suficiente. Desde entonces, se han introducido numerosas
mejoras en los ensayos que utilizan la actividad peroxidasa.
Los desarrollos respectivos de métodos tales como las pruebas de aglutinación al látex (Adams et all, 1974), inmunodifusión radial
(Songster et all, 1980) y la hemaglutinación reversa (Scito et all, 1984), han permitido la puesta a punto de métodos de detección
mas sensibles.
El kit Hemotest® se ha desarrollado para detectar cantidades ínfimas de sangre en heces, que no son detectables
por el método Guaiaco. Los resultados de los estudios clínicos indican que con el método Guaiaco solo se
obtienen resultados positivos en el 50-60 % de los pacientes con cáncer colorrectal y en el 25-30 % de pacientes
con pólipos. Hemotest® es específico de la hemoglobina humana nativa no desnaturalizada: no reacciona ni con
hemoglobinas animales, ni con la vitamina C, ni con otras peroxidasas. Por otro lado, no son necesarios ningún
régimen ni restricción particular previamente a la realización de la prueba.
3.
Principio de la prueba
Hemotest® es un ensayo inmunocromatográfico sobre membrana, que utiliza un método sándwich de captura.
Combina un anticuerpo policlonal conjugado con oro coloidal y anticuerpos monoclonales fijados a la membrana.
Durante la migración del líquido a lo largo de la membrana, el anticuerpo policlonal conjugado con oro coloidal se
une a la hemoglobina presente en la muestra. El anticuerpo monoclonal específico de la hemoglobina, captura el
complejo antígeno-anticuerpo en la zona reactiva produciendo una banda de color púrpura: el ensayo es positivo.
La aparición de una banda de color púrpura en la zona de control de la prueba, demuestra que ésta ha funcionado
correctamente.
4.
Componentes del kit
El kit Hemotest® contiene los materiales necesarios para la realización de 20 pruebas.
. 20 dispositivos, envasados en bolsas individuales con desecante.
. 20 tubos de recogida de muestras con 2 ml de tampón de dilución.
. Manual de instrucciones
5.
Material no provisto
. Cronómetro avisador
. Controles: positivo y negativo
6.
Información acerca de la prueba
6.1
.
.
.
.
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Precauciones
Usar el kit respetando las condiciones de diagnóstico in vitro, antes de la fecha de caducidad.
No comer, beber o fumar durante la realización de la prueba.
Usar guantes de laboratorio desechables mientras se realiza la prueba. Considerar las muestras
clínicas como potencialmente infecciosas y manipular de acuerdo con las habituales
recomendaciones y buenas prácticas clínicas.
Para la obtención de unos resultados óptimos, seguir cuidadosamente el procedimiento del ensayo
e instrucciones de conservación.
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.
.
Para prevenir la formación de condensación, no abrir el sobre con el dispositivo hasta haber
alcanzado la temperatura ambiente.
No usar dispositivos o tampones ya utilizados. Proceder a su eliminación siguiendo los
procedimientos reservados a materiales potencialmente peligrosos.
Limpiar las salpicaduras utilizando un desinfectante adecuado.
6.2
Límites de la prueba
.
Para la fiabilidad de los resultados, respetar las precauciones de uso y seguir el procedimiento de
uso. Referirse al apartado de interpretación de resultados.
Como en cualquier prueba diagnóstica, confrontar los resultados obtenidos con otras pruebas
clínicas: fibroscopia, endoscopia o colonoscopia.
Atención a los resultados falsamente negativos, que pueden aparecer cuando la sangre no está
uniformemente distribuida o cuando los sangrados debidos a las patologías intestinales son
intermitentes o inexistentes.
Tener en cuenta que la presencia de sangre en las heces en caso de hemorroides, estreñimiento,
hematuria, durante el período menstrual o por otras patologías (enfermedad de Crohn, rectocolitis
hemorrágica, diarreas infecciosas o parasitarias), pueden dar lugar a resultados falsamente
positivos.
Tener en cuenta que el kit Hemotest®, no detecta concentraciones muy débiles de hemoglobina
humana (inferiores a 0,2 µg/ml de tampón o a 20 µg/g de heces).
.
.
.
.
.
6.3
Conservación y estabilidad del kit
.
.
No utilizar después de la fecha de caducidad del kit.
Conservar el envase en un entorno seco a una temperatura entre 4 y 30ºC. No congelar.
6.4
Conservación de la muestra
.
Las heces frescas se pueden conservar durante 24 horas a temperatura ambiente o durante 3 días
entre 4 y 8ºC. De esta manera, la hemoglobina contenida en las heces, permanece estable.
El tampón de dilución en cual se han recogido las muestras de heces se puede conservar durante
14 días a temperatura ambiente o durante 6 meses entre 4 y 8ºC.
.
6.5
Control de calidad del ensayo
Alldiag realiza un control de calidad por cada lote de kits. Esto permite verificar el volumen de muestra
necesario y suficiente, y supervisar todo el procedimiento de realización.
Se recomienda encarecidamente la utilización de controles positivos y negativos para verificar las
prestaciones de la prueba, sobre cada nuevo lote o envío. En el caso de utilización de controles
liofilizados, es necesario reconstituir dichos controles de forma previa un día antes de su uso.
7.
Procedimiento del ensayo
.
En caso de periodo menstrual, retrasar la recogida de la muestra durante 3 días. Abstenerse de ingerir
alcohol, aspirinas u otros medicamentos irritantes gástricos, que podrían provocar sangrado, al menos
durante las 48 horas previas a la toma de muestra.
Llevar el kit a temperatura ambiente al menos 30 minutos antes de su utilización. Colocar el dispositivo de
ensayo en una superficie plana. Una vez abierta la bolsita que contiene el dispositivo, realizar la prueba
antes del transcurso de una hora.
Sacudir el tubo con el tampón para que descienda de las paredes al fondo.
Recoger una pequeña muestra de heces frescas en un contenedor limpio. En caso de sangrado o heces
negras, recoger una muy pequeña cantidad de muestra (del tamaño de una cabeza de alfiler).
.
.
.
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1)
2)
3)
Desenroscar el tapón azul del tubo hasta el final para retirar el bastón aplicador.
Introducir el bastoncillo en la muestra de heces en diferentes lugares. Si fuese necesario, retirar el exceso
de heces en un papel absorbente.
Volver a insertar el aplicador con el tapón azul en el tubo de recogida y enroscarlo firmemente.
4)
5)
6)
Agitar sacudiendo enérgicamente el tubo de recogida para homogeneizar la solución.
Desenroscar el tapón rojo situado en la parte inferior del tubo de recogida.
Manteniendo el tubo en posición vertical, apretar para dispensar 3 gotas en el pocillo “S” del dispositivo.
Leer los resultados a los 5 minutos. No interpretar resultados después de 10 minutos.
8.
Evaluación
8.1
Resultados del ensayo
POSITIVO
Banda de control “C” púrpura
y
Banda de test “T” púrpura
(incluso con intensidad débil)
NEGATIVO
Banda de control “C” púrpura
y
Ausencia de banda test “T”
Ausencia de banda control “C”
(incluso con banda test “T” púrpura)
Presencia de hemoglobina
humana en la muestra
La prueba es negativa.
Ausencia de hemoglobina humana
en la muestra
La prueba es no válida:
reiniciar el procedimiento con
un nuevo dispositivo.
Procedimiento erróneo o elevada
viscosidad de la muestra
NO VÁLIDO
8.2
La prueba es positiva.
Resultados clínicos
8.2.1 Sensibilidad
La sensibilidad analítica de Hemotest® es de 0,2 µg/ml de tampón o de 20 µg/g de heces.
8.2.2 Especificidad
HEMOTEST es específico de la hemoglobina humana nativa, no desnaturalizada. El ensayo no
reacciona con las hemoglobinas de caballo, cerdo, vaca, pollo, conejo, rata, cabra o ratón. Se han
probado extractos acuosos de brócoli, coliflor, nabo o rábano rojo, así como la adición de una
solución de rábano a hemoglobina humana, no encontrándose interferencias con el ensayo.
8.2.3 Precisión
En estudios de 5 grupos de 20 muestras de heces negativas realizados, en el que a cada grupo se
añadieron concentraciones de hemoglobina humana de: 0, 37,50,62 y 2000 ng/ml, los resultados
obtenidos por Hemotest®, se obtuvo una correlación del 97% con los valores esperados,
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8.2.4
Estudio comparativo
Hemotest®/ Hemotop®
Pacientes sin seguimiento de dieta previa al muestreo
HEMOTEST®
8.2.5
Positivo
Negativo
Total
Positivo
53
0
53
HEMOTOP®
Negativo
0
47
47
Total
53
47
100
Evaluación en caso de detección generalizada
HEMOTEST® se ha evaluado en el caso de una campaña de detección masiva de una
población de 26.827 personas con más de 30 años, en una zona de Beijing (República
Popular de China).19.852 personas entraron en la campaña de detección, con una
adhesión del 74%. La media de edad fue de 50 años.
501 personas fueron positivas con HEMOTEST®, el 5.6%, frente al 35.36% que dio la
prueba del guaiaco. Las 501 personas positivas con HEMOTEST® fueron analizadas con
colonoscopia. Se encontraron lesiones positivas en el 77.8% de ellas.
La siguiente tabla resume las patologías que se encontraron:
Naturaleza de las lesiones encontradas en la colonoscopia
Patología
Número de casos
Pólipo indefinido
127
Colon normal
111
Colitis crónica
107
Hemorroides
51
Adenoma
41
Pólipo inflamatorio
17
Rectocolitis hemorrágica
17
Cáncer colorrectal
14
Colon melanopático
5
Grieta anal
4
Pólipo proliferativo
3
Divertículo de colon
3
Angioma reticulado
1
De los 12 casos de cáncer colorrectal, 4 estaban en estado Dukes A, 7 en estado Dukes B
y 1 en estado Dukes C. Se identificó una subpoblación de riesgo con el siguiente criterio:
antecedentes familiares de cáncer colorrectal, cáncer colorrectal o adenoma preexistente,
colecistectomía de mas de 10 años, rectocolitis hemorrágica severa de mas de 10 años,
hemorragia desconocida. Dentro de la población de riesgo, se encontraron 2 cánceres
colorrectales (0.28%).
En la población si riesgo conocida, se identificaron 12 casos de cáncer colorrectal (0.05%).
El 1.07% de los resultados positivos por HEMOTEST®, correspondieron a cáncer
colorrectal. El 91.66% de los casos de cáncer detectados por HEMOTEST® fueron en un
estadío relativamente temprano. Esto demuestra el interés de HEMOTEST® como detector
temprano del cáncer de colon, de manera más sensible y específica que el test Guaiaco.
8.2.6
Valores de referencia
Los estudios que usan hematíes marcados con 51Cr, muestran la existencia de
hemorragias fisiológicas en sujetos sanos, que corresponde a un volumen de 0.5 a
2 ml por día. Considerando un volumen de heces medio de 150g por día, una
hemorragia fisiológica corresponde hasta 2 mg de hemoglobina por gramo de
heces.
Un HEMOTEST® positivo ofrece un dato esencial que permite una asistencia
médica precoz de un cáncer colorrectal, pero no está diseñado para detectar e
identificar el origen de la patología por si solo.
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