Bestämning av kaseinets isoelektriska punkt

ia Commons
ed
Kyhn, Wikim
Foto Stefan
Laboration
Bestämning av kaseinets IP
Proteiners löslighet är minst vid den isoelektriska punkten (Ip). Ip är det pH vid vilket sum­
man av proteinets alla laddningar är 0. Vid Ip finns inga repulsionskrafter mellan protein­
molekylerna, men de laddade sidokedjorna som finns kan attraheras av motsatt laddning
på andra proteinmolekyler. Molekylerna kan därför attraheras till varandra och bilda stora
aggregat av molekyler, dvs. proteinet fälls ut. Fällningen kan lösas igen om lösningens pH
ändras. Denna upplösning sker gradvis. Ip kan därför bestämmas som det pH då fällningen
är maximal.
Kasein, som används vid laborationen, är det viktigaste proteinet i mjölk. I laborationen
undersöker du hur utfällning av kasein varierar i lösningar av olika pH. Uppgiften är att
bestämma proteinets isoelektriska punkt. Läs igenom hela beskrivningen innan du påbörjar
experimentet.
Säkerhet
Material och
kemikalier
Utförande
Både syra och bas är frätande, iaktta försiktighet. En riskbedömning ges av undervisande
lärare.
9 provrör (ca 15 cm, väldiskade), 9 korkar (till provrören), mätpipetter eller byrett, kasein­
lösning 0,5 % -ig, natriumhydroxid 1 mol/dm3, ättiksyra med koncentrationerna 0,01 mol/
dm3, 0,1 mol/dm3 och 1 mol/dm3
Framställ kaseinlösningen enligt följande:
1. Lös 0,25 g kasein i ca 20 cm3 ljummet vatten och exakt 5,0 cm3 natriumhydroxidlös­
ning. Låt stå på omrörare. När allt har löst sig, tillsätt exakt 5,0 cm3 ättiksyra.
2. Späd därefter lösningen till 50 cm3 och justera pH till 7,0. Lösningen kan ha opalescent
utseende, men får inte ha fällning!
3. Gör i ordning 9 provrör (och numrera dessa) enligt tabellen nedan, genom att pipet­
tera med mätpipett eller använda byrett.
4. När alla lösningar är färdiga, tillsätt 1 cm3 kaseinlösning till varje rör. Försök göra
Laborationen har utarbetats av
Kemilärarnas resurscentrum, 2014.
Vux-projektet genomförs med stöd av Skolverket,
se www.bioresurs.uu.se/Vuxenwebben
tillsättningarna samtidigt. Skaka, gärna med en provrörsskak, och studera lösningarnas
utseende. Notera om det bildats opalescens eller fällning.
5. Studera lösningarnas utseende igen efter 30 minuter och notera även här om det bil­
dats opalescens eller fällning. Skaka rören så att eventuell fällning syns bra.
6. Ange fällning (+) respektive gradera opalescens (1-3) genast, samt efter 30 minuter.
Rör
Lösningens pH
1
5,9
2
5,6
3
5,3
4
5,0
5
4,7
6
4,4
7
4,1
8
3,8
9
3,5
Dest vatten cm3
8,4
7,8
8,8
8,5
8,0
7,0
5,0
1,0
7,4
Ättiksyra 0,01 M cm3
0,6
1,3
-
-
-
-
-
-
-
Ättiksyra 0,1 M cm3
-
-
0,3
0,5
1,0
2,0
4,0
8,0
-
Ättiksyra 1 M cm3
-
-
-
-
-
-
-
-
1,6
Opalescens/Fällning genast
Opalescens/Fällning 30 min
Resultat och
utvärdering
Frågor att fundera över:
• Varför är proteinerna svårare att fälla ut vid pH utanför Ip?
• Vid Ip är proteinernas laddning 0. Vilken är laddningen i rör 2 resp. 9?
• Om lösningen skulle innehålla ytterligare ett protein med Ip 4,9, skulle Isoelektrisk
utfällning vara ett bra sätt att skilja proteinerna åt?
Begrepp eleven ska ha förväntade kunskaper om efter laborationen:
•
•
•
•
Isoelektrisk punkt = summan av proteinets alla olika laddningar är 0
Aminosyrors olika sidogrupper (deras funktionella grupper, laddningar etc)
Utfällning av protein
Påverkan av pH
Laborationen har utarbetats av
Kemilärarnas resurscentrum, 2014.
Vux-projektet genomförs med stöd av Skolverket,
se www.bioresurs.uu.se/Vuxenwebben