PakAuto assay

BRUKSANVISNING
PakAuto® assay
REF
PakAuto
IVD
INNEHÅLLSFÖRTECKNING
AVSEDD ANVÄNDNING ............................................................................................................................................... 2
SAMMANFATTNING AV FÖRKLARING ...................................................................................................................... 2
PROCEDURENS PRINCIP ............................................................................................................................................ 2
REAGENS ..................................................................................................................................................................... 2
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER ...................................................................................................................................... 3
FÖRSIKTIGHET............................................................................................................................................................. 3
PROVTAGNING............................................................................................................................................................. 3
METOD .......................................................................................................................................................................... 4
Material som medföljer ............................................................................................................................................. 4
Ytterligare material som krävs .................................................................................................................................. 4
Testmetod................................................................................................................................................................. 4
KVALITETSKONTROLL ............................................................................................................................................... 7
TOLKNING AV TESTRESULTAT ................................................................................................................................. 8
BEGRÄNSNINGAR ....................................................................................................................................................... 8
SPECIFIKA PRESTANDAEGENSKAPER .................................................................................................................... 8
REFERENSER ............................................................................................................................................................... 8
PakAuto assay
1
303467.IFUSV REV B
AVSEDD ANVÄNDNING
PakAuto assay är en kvalitativ enzymlänkad immunosorbent analys (ELISA) i fast fas utformad för att
trombocytautoantikroppar eluerade från patientens trombocyter eller som cirkulerar i patientens serum eller plasma.
detektera
SAMMANFATTNING AV FÖRKLARING
Autoimmun trombocytopen purpura (AITP) är en av de vanligaste orsakerna till immun trombocytopeni. Ungefär hälften av alla AITP-fall
förekommer i samband med andra sjukdomstillstånd som lymfom, systemisk lupus erythematosus (SLE) och HIV-infektion; återstående
fall anses vara idiopatiska. På grundval av den kliniska presentationen kan AITP delas in i två typer: akut AITP, en barnsjukdom som
vanligtvis är självbegränsande, samt kronisk AITP förekommande hos vuxna och som sällan förbättras spontant.
De flesta antikroppar som är associerade med AITP erkänner trombocyt membranglykoproteiner, särskilt GPIIb/IIIa, GPIb/IX, och
1,2
1,2, 3,4,5
GPIa/IIa. Cirkulerande antikroppar reaktiva med dessa mål kan ofta detekteras i plasma eller i serum hos patienter med AITP
.
Det är emellertid att föredra att karaktärisera trombocyt-associerade immunoglobuliner, framställda från trombocytrik plasma och
eluerade från trombocytytan, för att bekräfta autoreaktivitet. Många tester för identifiering av trombocyt-associerade immunoglobuliner
2
saknar specificitet i det att de ofta ger positiva resultat hos patienter med icke-immuna typer av trombocytopeni.
PakAuto Solid Phase ELISA-mikrobrunnar innehåller monoklonal-fångade glykoproteiner IIb/IIIa, Ib/IX, och Ia/IIa. Analysen är utformad
för att detektera trombocytglykoprotein-specifika autoantikroppar i patientserum eller plasma (cirkulerande antikroppar), eller
autoantikropp eluerad från ytan av sina trombocyter.
PROCEDURENS PRINCIP
Patientens serum eller plasma används för att detektera cirkulerande autoantikropp medan eluat härrörande från trombcytrik plasma
används för att detektera autoantikroppar närvarande på ytan av patientens trombocyter. Provet tillsätts i mikrobrunnar belagda med
trombocytglykoproteiner som tillåter antikropp, om närvarande, att binda. Obundna antikroppar tvättas sedan bort. En alkalisk fosfatasmärkt antihuman-globulin-reagens (anti-IgG/A/M) tillsätts till brunnarna och inkuberas. Obundet anti-IgG/A/M tvättas bort och substratet
PNPP (p-nitrofenylfosfat) tillsätts. Efter en 30-minuters inkubation stoppas reaktionen med stopplösning. Optisk densitet för den färg
som utvecklas mäts i en spektrofotometer.
REAGENS
Maximalt antal tester per sats:

PakAuto:
5 tester per sats
Alla reagenser ska förvaras enligt anvisningar på etiketten.
REF
MS
TCW
SD
SB
ESS
AH
CRP
404552
Mikrobrunnsremsor: Flatbottnade mikrobrunnsremsor på vilka trombocytglykoproteiner IIb/IIIa, Ib/IX, och Ia/IIa
har immobiliserats. Mikrobrunnarna ligger i en återförslutningsbar foliepåse. Klara att använda.
403622
Koncentrerad tvättlösning (10X): Tris-(hydroximetyl)-aminometanbuffrad lösning innehållande natriumklorid och
Tween 20. 1 % natriumazid. Späd med avjoniserat eller destillerat vatten före användning. Förvara bruksfärdig
Tvättlösning i upp till 48 timmar i rumstemperatur eller upp till sju dagar vid 2 till 8 °C.
403831
Provspädningsmedel: Fosfatbuffrad saltlösning innehållande bovinalbumin och mus-serum. 0,1% natriumazid.
Klar att använda.
403613
Substratbuffert: Denna lösning innehåller dietanolamin och magnesiumklorid. 0,02 % natriumazid. Klar att
använda. Skyddas mot ljus.
403603
Stopplösning: Klar att använda.
404588
Antihumant IgG/A/M-Konjugat: Alkaliskt fosfataskonjugerad affinitetsrenad getantikropp
immunglobuliner (IgG/A/M). 0,1% natriumazid. Späds i Provspädningsmedel före användning.
404590
Cell-Återsuspension och Konserveringslösning: Fosfatbuffrad saltlösning innehållande EDTA. 0,1% natriumazid.
Klar att använda.
PakAuto assay
2
mot
humana
303467.IFUSV REV B
BS
ES
PN
PC
NC
PCP
NCP
PS
404560
Buffertlösning: Tris-lösning innehållande bovinalbumin. 0,1% natriumazid.
404565
Elueringslösning: Glycinbuffert med lågt pH.
403594
PNPP-substrat: (p-nitrofenylfosfat) Kristallint pulver. Bereds med avjoniserat eller destillerat vatten och späds i
Substratbuffert före användning. Skyddas mot ljus.
404600
Positiv Serumkontroll: Humant serum. 0,1% natriumazid. Späds i Provspädningsmedel före användning.
404576
Negativ Serumkontroll: Humant serum. 0,1% natriumazid. Späds i Provspädningsmedel före användning.
404579
Positiv Trombocytkontroll (Positiv Eluat-Kontroll): Vakuumtorkade humantrombocyter belagda med antikropp.
Rehydrera före användning med Cell-Återsuspension och Konserverande Lösning.
404578
Normal Trombocytkontroll (Negaitv Eluat-Kontroll): Vakuumtorkade poolade humantrombocyter. Rehydrera före
användning med Cell-Återsuspension och Konserverande Lösning.
503019
Plattförseglare.
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER








Använd inte reagenser som är grumliga eller kontaminerade.
Försiktighet MÅSTE iakttas för att undvika kontamination av Provspädningsmedel och Konjugat. Oavsiktlig kontamination av dessa
reagenser med humant serum eller plasma medför neutralisering av Konjugatet och därefter misslyckat test.
Använd inte reagenser efter deras utgångsdatum.
De mikrobrunnar och reagenser som ingår i satsen ska inte användas tillsammans med andra testsystem.
Byte av komponenter till andra än de som tillhandahålls i denna sats kan leda till inkonsekventa eller felaktiga resultat.
Kassera alla oanvända delar av utspätt Konjugat, utspädda Positiva och Negativa Serumkontroller, samt utspätt och berett PNPPreagens efter varje körning.
Vid spädningar, följ pipettillverkarens anvisningar för lämpliga dispenserings- och sköljtekniker.
Enzymsubstratreaktionen som sker vid den slutliga inkubationen är temperaturkänslig och ska utföras i ett kontrollerat utrymme vid
22 till 25 °C.
FÖRSIKTIGHET



Allt humant serum som används i de Positiva och Negativa Kontrollerna för denna produkt har testats och befunnits vara negativa
för antikroppar mot HIV, HCV och HBsAg med hjälp av FDA-godkända metoder. Ingen testmetod kan dock ge fullständig garanti
att det inte finns HIV, hepatit C-virus, hepatit B-virus eller andra smittämnen. Därför ska dessa material hanteras som potentiellt
smittsamma.
En del av de reagenser som levereras med denna sats innehåller natriumazid som konserveringsmedel.
VARNING: Natriumazid reagerar med bly- och kopparrör och bildar högexplosiva metallazider. Om det kastas ut i en vask ska
vasken spolas med stora mängder vatten för att förhindra azidackumulering. Natriumazid är ett gift och är giftigt vid förtäring.
Kassera alla komponenter enligt lokala föreskrifter när analysen är avslutad.
PROVTAGNING
Serum eller Trombocytfattig Plasma - för detektering av cirkulerande auto-antikroppar
Blod ska samlas in med hjälp av aseptisk teknik i EDTA-antikoagulant eller som serum och testas medan det är färskt. Serum eller
trombocytfattig plasma som inte kan testas omedelbart ska förvaras vid 2 till 8 °C i högst 48 timmar eller frysas. Prover som fryses vid
-20 °C eller lägre håller sig i gott skick i upp till 2 år.
Serum eller plasma bör separeras från röda blodkroppar före transport eller förvaring.
Partiklar eller aggregat i proverna kan ge falska positiva resultat eller dåliga kontrollvärden. Prover som innehåller partiklar ska
centrifugeras för att avlägsna partiklarna före test.
Prover ska delas upp i små volymer om de ska frysas för att undvika upprepade frysnings-/upptiningscykler.
PakAuto assay
3
303467.IFUSV REV B
Mikrobiellt kontaminerade, hemolyserade, lipemiska, ikteriska eller värmeinaktiverade prover kan ge inkonsekventa testresultat och ska
undvikas.
Trombocyter eller Trombocytrik Plasma - för detektering av autoantikroppar eluerade från trombocytytor.
8,9
Blod ska samlas in med hjälp aseptisk teknik i EDTA. Förvara helblod eller trombocytrik plasma vid rumstemperatur
(20-25 °C). Kyl eller frys inte trombocyter eller trombocytrik plasma.
7
7
För beredning av trombocyt-eluater krävs minst 1 x 10 trombocyter (5 x 10 trombocyter är att föredra). Tillräckligt prov kan erhållas
från patienter med trombocytvärden på  10.000/µl genom att samla in två 7 ml-rör helblod.
OBS:
Transport av blodprov kan resultera i minskade trombocyter. Om prover ska transporteras är det bättre att samla in ett större
prov för att säkerställa adekvata trombocyter för eluering.
Testa beredda Eluater omedelbart eller förvara frysta vid -80 °C för användning i framtida tester.
METOD
Material Som Medföljer
Flaskorna kan innehålla mer reagens än vad som anges på etiketterna. Se till att mäta upp reagenset med lämplig mätutrustning vid
spädning.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
6 – 2 x 8 Mikrobrunnsremsor
1 x 50 ml Koncentrerad Tvättlösning (10X)
1 x 14 ml Provspädningsmedel
1 x 14 ml Substratbuffert
1 x 14 ml Stopplösning
1 x 80 µl Antihumant IgG/A/M-Konjugat
1 x 50 ml Cell-Återsuspension och Konserveringslösning
1 x 2,5 ml Buffertlösning
1 x 2,5 ml Elueringslösning
3 x 50 mg PNPP-Substrat
1 x 0,3 ml Positiv Serumkontroll
1 x 0,7 ml Negativ Serumkontroll
1 Positiv Trombocytkontroll (Positiv Eluat-Kontroll)
1 Normal Trombocytkontroll (Negaitv Eluat-Kontroll)
6 Plattförseglare
Ytterligare Material Som Krävs
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
Provrör för patientprov och kontrollspädningar och för reagensspädningar
Överföringspipetter
Inställningsbara mikropipetter som ger 10 – 100 µl och 100 – 1.000 µl samt engångspipetter
Tidur
Mikroplattläsare som kan mäta OD vid 405 eller 410 och 490 nm
Avjoniserat eller destillerat vatten
Absorberande pappershanddukar
Mikroplattstvätt eller -apparat för
centrifug som kan separera serum eller plasma från patientprover
37 °C vattenbad eller inkubator
Mikrocentrifugrör
Mikrocentrifug för pelletering av trombocyter
7
Normala trombocyter (5 x 10 ) för elueringskontroll
Testmetod
1.
Låt alla reagenser uppnå rumstemperatur på 22-25 °C.
2.
Gör Bruksfärdig Tvättlösning genom att späda Koncentrerad Tvättlösning. Tillsätt 1 del Koncentrerad Tvättlösning till 9 delar
avjoniserat eller destillerat vatten. Blanda väl.
3.
Beräkna antalet patientprover (eluat eller serum/plasma) som ska testas. Använd Registreringsbladet och tilldela varje prov en
plats bestående av en kolumn. Registrera varje provs identitet på Registreringsbladet.
PakAuto assay
4
303467.IFUSV REV B
Bereda Provtrombocyter
4.
Bered trombocytpellets från patient- eller normala donatortrombocyter enligt följande:
a)
b)
c)
d)
e)
Bered trombocytrik plasma (PRP) genom att centrifugera EDTA-blodprov vid 110-150 rcf under 10 - 15 minuter.
Överför PRP till ett rent polypropylen-provrör och centrifugera vid 10.600 rcf i 5-10 minuter för att få en trombocytknapp.
Avlägsna plasma utan att störa trombocytknappen med hjälp av en överförings pipett.
Tillsätt 500 µl Cell-Återsuspension och Konserverande Lösning (CRP) till trombocytpelleten och blanda väl med en
överföringspipett så att pelleten sönderdelas helt. Överför trombocytsuspensionen till ett mikrofugrör och tvätta tre gånger
enligt beskrivning ovan med minst 500 µl cell-återsuspension och konserverande lösning. Försäkra att trombocytknappen helt
har återsuspenderats i varje tvättning för att tillåta avlägsnande av plasma från trombocytytorna.
7
Efter den sista tvätten bereds en trombocytpellet innehållande mellan 1 och 5 x 10 trombocyter. Detta kan göras genom att
återsuspendera trombocyterna med cell-återsuspension och konserverande lösning och justera trombocytantalet till 10.00050.000 trombocyter per µl. Överför 1 ml till ett mikrofugrör och centrifugera under 5 min vid 10.600 rcf för att pelletera.
(Alternativt ska en 5-10 µl pellet av trombocyter innehålla tillräckligt med trombocyter för att utföra eluering. Jämför pelleten
med ett identiskt rör innehållande 5-10 µlprovspädningsmedel.)
Efter pelletting av trombocytknappen avlägsnas fullständigt eventuella rester av cell-återsuspension och konserverande
lösning med hjälp av en överförings pipett. Sönderdela inte trombocytknappen.
Bereda Kontrolltrombocyter
5.
Bered kontrolltrombocytpellets enligt följande:
Tillsätt 500 µl Cell-Återsuspension och Konserverande Lösning till den Positiva Trombocytkontrollen (Positiv Eluat-Kontroll)
och, vid behov, den Normala Trombocytkontrollen (Negativ Eluat-Kontroll). Låt stå vid rumstemperatur under minst 10 minuter
för att rehydrera. Blanda väl med en överföringspipett så att pelletsen sönderdelas helt för att återsuspendera. Centrifugera vid
10.600 rcf i 5-10 minuter. Dekantera eller aspirera supernatanten och torka bort återstående buffert för att få en torr knapp
med trombocyter.
OBS:
Det är bättre att använda färska normala trombocyter för Negativ Eluat-Kontroll, men en torkad trombocyt medföljer för tillfällen
då normala trombocyter inte finns tillgängliga.
OBS:
Den Positiva Eluat-Kontrollen kan frysas för framtida användning. Frys eller tina inte beredd Positiv Eluat-Kontroll mer än två
gånger.
Bereda Prov och Kontroll-Eluater
6.
Bered Prov och Kontroll-Eluater enligt följande:
a)
b)
c)
7.
Se till att alla trombocytpellets är välsedimenterade och att all återstående cell-återsuspension och konserverande lösning
avlägsnats innan du fortsätter. Det är absolut nödvändigt att ta bort alla rester av cell-återsuspension och konserverande
lösning för att säkerställa att eluatet, när det bereds, inte späds ut.
Tillsätt 180 µl Elueringslösning till varje trombocytknapp och blanda med hjälp av en pipett. Låt blandningen stå i
rumstemperatur under 2 minuter. Centrifugera vid 10.600 rcf i 5-10 minuter i ett mikrofugrör.
Överför omedelbart supernatanterna (eluaten) till ett rent mikrofugrör och tillsätt 180 µl Buffertlösning i varje rör. Blanda väl.
Centrifugera vid 10.600 rcf i 10 minuter i ett mikrofugrör för att avlägsna eventuellt trombocytdebris.
När eluaten bereds ska man testa omedelbart för att undvika att antikropp fäster igen på trombocytdebris eller frysa för framtida
tester. Trombocyteluater kan förvaras frysta vid -80 °C för användning i framtida tester. Fortsätt till steg 9 om endast eluat ska
testas.
OBS: Späd inte eluaten.
Testa Serum/Plasma för Cirkulerande Antikropp
Bereda prover och kontroller
8.
9.
Späd enligt följande och blanda väl:
Volym Provspädningsmedel
Volym Prov
PC
150 µL
50 µL
NC
300 µL
100 µL
Patientserum eller plasma
300 µL
100 µL
Ta ut mikrobrunnen från påsen. Ta snabbt ut och återförslut remsor som inte behövs i skyddspåsen.
PakAuto assay
5
303467.IFUSV REV B
OBS:
Endast en ram medföljer satsen. Kasseras inte förrän alla remsor har använts.
OBS:
Orientera ramen med A1 i övre vänstra hörnet. Se till att alla remsor sitter ordentligt och har knäppts fast i sin ram. Märk eller
numrera varje remsa för att undvika fel. Behåll samma plattorientering under hela analysen.
10.
Tillsätt 300 µl Bruksfärdig Tvättlösning i alla brunnar och låt stå i rumstemperatur i 5-10 minuter.
11.
Aspirera eller dekantera kraftfullt och vänd upp och ned på absorberande handduk för att förhindra torkning.
12.
Tillsätt 50 µl av lämpligt eluat, utspädd kontroll eller utspätt patientserum/-plasma i brunnarna i en kolumn enligt bild 1.
OBS:
Tillsätt inte prover eller reagenser i blankbrunnar.
OBS:
Om flera patientprover testas samtidigt behövs endast en uppsättning kontroller. MÄRK VARJE REMSA FÖR ATT UNDVIKA
FEL.
13. Försegla mikrobrunnarna med en plattförseglare och inkubera i 30-35 minuter i vattenbad på 37 °C. Om en torr inkubator används
istället, ökas tiden med 10 minuter.
14. Späd Konjugat 1 till 100 i Provspädningsmedel. Använd en polypropylenbehållare.
Remsor
AH
2-2x8
20 µl
6-2x8
60 µl
SD
2,0 ml
6,0 ml
OBS:
Konjugatet är visköst. Fyll spetsen 2-3 gånger med Konjugat före dispensering och skölj efter tillsättning till
Provspädningsmedel.
Blanda väl.
15. TVÄTTSTEG
a)
b)
c)
d)
e)
OBS:
Aspirera eller dekantera innehållet i varje brunn och sug upp på absorberande handduk.
Tillsätt 300 µl Bruksfärdig Tvättlösning.
Aspirera eller dekantera.
Upprepa steg b + c för totalt 3 eller 4 tvättar.
Dekantera kraftigt efter den slutliga tvätten för att avlägsna all resterande tvättlösning. Vänd upp och ned på absorberande
handduk för att förhindra torkning.
Det är viktigt att helt avlägsna all tvättlösning efter den sista tvätten.
16. Tillsätt 50 µl utspätt Konjugat (gjort i ett tidigare steg) i alla brunnar UTOM de som utgör BLANKAR.
17. Försegla mikrobrunnarna med en plattförseglare och inkubera i 30-35 minuter i vattenbad på 37 °C. Om en torr inkubator används
istället, ökas tiden med 10 minuter.
18. Lös PNPP-substratet genom att tillsätta 0,5 ml avjoniserat eller destillerat vatten i flaskan. Sätt tillbaka proppen och blanda väl.
Skyddas mot ljus tills det ska användas.
19. Späd PNPP 1 till 100 i substratbuffert.
PakAuto assay
6
303467.IFUSV REV B
Remsor
2-2x8
6-2x8
PN
40 µl
120 µl
SB
4,0 ml
12,0 ml
Blanda väl. Skyddas mot ljus tills det ska användas.
20. TVÄTTSTEG
a)
b)
c)
d)
e)
Aspirera eller dekantera innehållet i varje brunn och sug upp på absorberande handduk.
Tillsätt 300 µl Bruksfärdig Tvättlösning.
Aspirera eller dekantera.
Upprepa steg b + c för totalt 3 eller 4 tvättar.
Dekantera kraftigt efter den slutliga tvätten för att avlägsna all resterande tvättlösning. Vänd upp och ned på absorberande
handduk för att förhindra torkning.
Fortsätt omgående med följande tre steg.
21. Tillsätt 100 µl av den utspädda PNPP-lösningen i alla brunnar UTOM de som utgör BLANKAR.
22. Låt mikrobrunnarna stå i mörker i 30 minuter vid RUMSTEMPERATUR (22-25 °C).
OBS:
Inkubationstiden och temperaturen efter tillsatsen av PNPP är kritisk. Ändra INTE fastställd inkubationstid eller temperatur. För
konsekvensens skull, börja tidtagningen efter tillsats av reagens i första brunnen.
23. Stoppa reaktionen genom att tillsätta 100 µl Stopplösning till varje brunn i samma ordning som vid tillsats av substrat. Tillsätt 200 µl
stopplösning till blankbrunnarna.
24. Läs av absorbansen (OD) för varje brunn vid 405 eller 410 nm genom att använda ett referensfilter på 490 nm. Om resultaten inte
kan avläsas genast, sätt tillbaka brunnarna i ett mörkt utrymme i upp till 30 minuter.
25. Subtrahera de värden som erhålls i blankbrunnarna från alla prov- och kontrollbrunnar. Många ELISA-läsare är programmerade att
automatiskt utföra detta steg.
26. Registrera resultaten på registreringsbladet.
KVALITETSKONTROLL
Kvalitetskontroll i PakAuto assay är inbyggd i testsystemet genom att inkludera Positiva och Negativa Kontroller. Använd Positiv
Serumkontroll och Negativ Serumkontroll vid testning av enbart patientserum/-plasma. Inkludera Positiv Trombocytkontroll och Normal
trombocytkontroll vid testning av patientens eluat-prover. Dessa kontroller ska inkluderas i varje test som körs för att hjälpa till att
fastställa om tekniska fel eller reagensfel har inträffat.
Kriterier för ett giltigt test:
Negativ Kontroll
Positiv Kontroll
Eluat
 0,100 (IIb/IIIa rad)
 1,000
Serum
 0,160 (IIb/IIIa rad)
 1,000
OD-avläsningar som erhålls för dubbeltestresultat ska ligga inom 20 % av medelvärdet av de två värdena. Prover vars resultat ligger
utanför denna gräns ska testas på nytt.
OBS:
Dåliga dublettresultat kan vara en följd av utelämnat reagens eller prov, ojämn tillsats av reagenser, ojämn temperatur under
inkubationer, läckljus under den slutliga inkubationen eller korskontamination mellan brunnar. Underlåtenhet att dubbeltesta
kan leda till att felaktiga resultat godtas.
TOLKNING AV TESTRESULTAT
Testresultat som visar OD-värden som är lika höga eller högre än 2 gånger det värde som erhölls för genomsnittet av de negativa
kontrollerna för motsvarande glykoprotein (2 negativa kontrollvärden för varje glykoprotein) betraktas som positiva resultat.
PakAuto assay
7
303467.IFUSV REV B
BEGRÄNSNINGAR








Felaktiga resultat kan uppstå på grund av bakteriekontamination av testmaterial, otillräckliga inkubationstider, otillräcklig tvättning
eller dekantering av testbrunnar, exponering av substrat för läckljus, överhoppade testreagenser, exponering för högre eller lägre
temperaturer än föreskrivet, otillräckliga eller alltför stora trombocyter, eller överhoppade steg.
Förekomst av immunkomplex eller andra immunglobulinaggregat i patientprovet kan orsaka ökad ospecifik bindning och ge falskt
positiva resultat i denna analys.
Vissa antikroppar med låg titer och låg aviditet kan inte detekteras med denna analys.
Resultaten av denna analys ska inte användas som enda grund för ett kliniskt beslut.
Produkten är särskilt utformad för att upptäcka autoantikroppar eluerade från patientens trombocyter. En positiv reaktion erhållen
enbart med patientserum eller -plasma indikerar därför inte nödvändigtvis närvaron av en autoantikropp. Trombocytspecifika
alloantikroppar kan också vara reaktiva med denna analys.
PakAuto assay är utformad för att detektera autoantikroppar reaktiva med trombocytglykoproteiner IIb/IIIa, Ib/IX och Ia/IIa.
Autoantikroppar mot andra trombocytaggregationshämmande proteiner förväntas inte reagera i denna analys.
Det är möjligt att en autoantikropp kan ge falskt negativt resultat i denna analys på grund av steriskt hinder av de humana
autoantikropparna med de murina monoklonala antikropparna som används för att fånga in trombocytglykoprotein.
PakAuto är avsett att användas som ett screeningtest. De reaktionsmönster som ett testprov producerar med denna produkt ska
inte ensamt åberopasför att fastställa identiteten hos en trombocytantikropp. Därför ska positiva eller negativa resultat som erhålls
med användning av denna analys användas i kombination med kliniska fynd eller andra serologiska tester.
SPECIFIKA PRESTANDAEGENSKAPER
Vid rätt förvaring och användning i enlighet med ovan beskrivna metoder kan denna produkt detektera autoantikroppar mot
trombocytglykoproteiner som anges på registreringsbladet.
För att säkerställa lämplig reaktivitet och specificitet testas varje parti av PakAuto assay innan det släpps ut med prover som man vet
innehåller antikroppar som reagerar med glykoproteiner identifierade på det medföljande registreringsbladet, samt prover som man vet
saknar sådana antikroppar.
Utvärdering av Prestanda
Jämförande Metod
Positiv
Negativ
PakAuto
assay
Totalt
Positiv
24
1
25
Negativ
23
49
72
Totalt
47
50
97
Överensstämmelse:
Sampositivitet:
Samnegativitet:
Jämförande metod:
75,3 %
51,1 %
98 %
Trombocytassocierad IgG* (flödescytometri)
6,7
*PAIgG har ett lågt positivt prediktivt värde för ITP.
REFERENSER
1.
2.
George JN, El-Harake MA, Raskob GE: N. Engl J. Med 331:1207, 1994.
George JN, El-Harake MA, Aster RH: Thrombocytopenia due to enhanced platelet destruction by immunologic mechanisms. I Williams
Hematology, E Boytler, et al., eds, 5th ed, McGraw-Hill, 1995, p 1315.
3. Bussel JP, Schreiber AD: Immune thrombocytopenic purpura. I Hematology: Basic Principles and Practice, R. Hoffman, et al., eds,
Churchill Livingstone, Inc., New York, 1991, p 1485.
4. McMillan R, Imback PA: Immune thrombocytopenic purpura. I Thrombosis and Hemorrhage, J. Loscalzo and Al Schafer, eds, Blackwell
Scientific Publications, Oxford, 1994, p 575.
5. Aster RH: The immunologic thrombocytopenias. I Platelet Immunology, TJ Kunicki, JN George, eds, Lipincott, Philadelphia, 1989, p 387.
6. Kelton JG, Powers PJ, Carter CJ: A Prospective Study of the Usefulness of the Measurement of Platelet-Associated IgG for the Diagnosis
of Ideopathic Thrombocytopenia Purpura. Blood 1982; 60 No.4: 1050.
7. McMillan R, et.al. Platelet associated and Plasma Anti-Glycoprotein Autoantibodies in Chronic ITP. Blood, 1987; 70 No.4: 1040.
8. American Association of Blood Banks, Blood FAQ, www.aabb.org/resources/bct/Pages/bloodfaq.aspx, September 12, 2013.
9. Canadian Blood Services, Clinical Guide to Transfusion 2. Blood Components: www.transfusion medicine.ca, March 2013.
10. Roback, John D., Combs, Martha Rae, Grossman, Brenda J., Hillyer, Christopher D., Technical Manual AABB, Sixteenth Edition, 2008.
PakAuto assay
8
303467.IFUSV REV B
Immucor GTI Diagnostics, Inc.
20925 Crossroads Circle
Waukesha, WI 53186-4054 USA
EC REP
Immucor Medizinische Diagnostik GmbH
Adam-Opel-Strasse 26A
Rodermark 63322
Germany
USA och internationell kontaktinformation:
Teknisk support:
waukeshatechsupport@immucor.com
www.immucor.com
US-patent nr 5.514.557
© 1996-2015 Immucor GTI Diagnostics, Inc.
303467.IFUSV Rev B
2015-05-15
Warning
Danger
H302
H318
H412
EUH032
P264
P270
P273
P280
P301 + P312
P305 + P351 + P338
P310
P330
PakAuto assay
Varning
Fara
Skadligt vid förtäring
Orsakar allvarliga ögonskador
Skadliga långtidseffekter för vattenlevande organismer
Utvecklar mycket giftig gas vid kontakt med syra
Tvätta … grundligt efter användning
Ät inte, drick inte och rök inte när du använder produkten
Undvik utsläpp till miljön
Använd skyddshandskar/skyddskläder/ögonskydd/ansiktsskydd
VID FÖRTÄRING: vid obehag, kontakta GIFTINFORMATIONSCENTRALEN/läkare
VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter. Ta ur eventuella kontaktlinser om
det går lätt. Fortsätt att skölja
Kontakta genast GIFTINFORMATIONSCENTRALEN/läkare
Skölj munnen
9
303467.IFUSV REV B